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第一章 基因工程药物概述 1

第一节 基因工程药物发展史 1

一、基因工程技术发展史 1

二、基因工程药物发展史 2

第二节 基因工程药物发展现状 4

一、国内外基因工程药物产品结构现状 4

二、基因工程药物品种发展动态 5

第三节 基因工程技术与现代制药工业 19

一、应用基因工程技术研究开发新药 19

二、应用基因工程技术改造传统制药工业 21

第四节 基因工程药物的质量控制 23

一、原材料的质量控制 23

二、培养过程的质量控制 23

三、纯化工艺过程的质量控制 24

四、最终产品的质量控制 25

第五节 基因工程药物的审批 25

一、中试产品 26

二、临床前安全性研究 26

三、临床研究 27

四、审批程序 27

第二章 基因工程药物的上游技术 29

第一节 基因克隆载体 29

一、质粒载体 29

二、λ噬菌体 31

三、粘粒载体 37

四、M13噬菌体载体 39

五、噬菌粒pUC118和pUC119 41

第二节 重组DNA技术的有关工具酶及其应用限制性内切核酸酶 42

第三节 核酸制备技术 66

一、用碱抽提法分离质粒DNA 66

二、染色体DNA的制备 69

三、真核细胞RNA的制备 70

四、DNA的凝胶电泳和凝胶中DNA的回收 72

五、用PCR技术扩增DNA 78

第四节 基因的克隆、筛选和鉴定 88

一、用λgt10构建cDNA文库和cDNA文库的核酸杂交筛选 88

二、在Okayama-Berg载体中高效克隆全长cDNA和cDNA的功能筛选 93

三、基因组DNA表达文库的构建和文库的免疫学筛选 99

四、用质粒载体克隆DNA和菌落的原位杂交筛选 103

五、M13克隆和嵌套缺失突变体的构建 107

第五节 基因表达 113

一、以融合蛋白的形式表达药物基因 113

二、直接表达天然蛋白基因 114

三、蛋白药物基因的表达和分泌 118

第三章 基因工程药物的下游技术 127

第一节 基因工程菌的培养 127

一、细菌培养的方式 127

二、发酵罐的反应特性和操作控制技术 128

第二节 基因工程细胞的培养 131

一、细胞培养的方式 131

二、细胞培养环境条件的控制 133

第三节 细胞破碎与固液分离 133

一、机械方法 133

二、非机械方法 134

第四节 重组蛋白质回收技术 136

一、包涵体产物的分离 136

二、重组蛋白质N-末端蛋氨酸的除去方法 137

三、回收重组蛋白质的常用技术 139

第五节 重组蛋白的色谱分离纯化技术 141

一、色谱的分离模式 141

二、色谱条件及纯化工艺的优化 142

三、应用实例 143

第六节 目标产品的检测与质量控制 145

一、重组蛋白质的纯度分析 145

二、重组蛋白质的氨基酸组成分析 145

三、重组蛋白质的浓度测定和分子量测定 146

四、肽谱分析 146

五、蛋白质的二硫键分析 147

六、重组蛋白的生物活性分析 148

第四章 基因工程药物的主要品种与临床应用 149

第一节 重组乙肝疫苗 149

一、重组乙肝表面抗原疫苗（酵母） 150

二、重组乙肝表面抗原疫苗（CHO细胞） 152

第二节 干扰素类药物 154

一、人干扰素α1b 154

二、人干扰素α2α 157

三、人干扰素α2b 160

四、人干扰素γ 161

第三节 白细胞介素类药物 164

一、人白细胞介素-2 165

二、新型人白细胞介素-2 167

第四节 集落刺激因子类药物 169

一、重组人粒细胞集落刺激因子 169

二、重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 171

三、重组人多潜能细胞集落刺激因子 174

第五节 促红细胞生成素 175

第六节 人生长激素 177

重组人生长激素 178

第七节 人表皮生长因子 180

重组人表皮生长因子 180

第八节 基因工程溶血栓药物 181

组织纤溶酶原激活剂 182

第九节 基因工程抗体与导向药物 185

一、基因工程抗体的构建和分类 185

二、基因工程抗体的表达 185

三、导向药物 186

四、基因工程抗体与导向药物的临床应用 186

第十节 基因治疗 187

一、基因转移及导入技术 187

二、基因治疗的载体系统 188

三、基因治疗的临床应用 189

附录一 基因工程安全管理办法 192

附录二 基因工程人α型干扰素制备及质量控制要点 196

附录三 人用鼠源性单克隆抗体制备及质量控制要点 201

附录四 人的体细胞治疗及基因治疗临床研究质量控制要点 207