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第一部分 基因工程实验 1

第一章 组织细胞遗传物质的提取 1

实验一 动物胸腺或脾脏有核细胞基因组DNA提取 1

实验二 哺乳动物组织mRNA提取 3

实验三 植物组织的基因组DNA提取 6

实验四 植物细胞RNA提取 8

实验五 细菌基因组DNA的制备 10

实验六 大肠杆菌质粒DNA的小量提取 12

第二章 核酸凝胶电泳分离与纯化方法 15

实验七 核酸的琼脂糖凝胶电泳 15

实验八DNA片段的回收与纯化 17

实验九 紫外分光光度法测定核酸含量 19

实验十PCR反应及其产物检测 21

第三章 DNA的重组连接和克隆的筛选鉴定 27

实验十一 限制性内切酶切割DNA 27

实验十二DNA的重组和连接 32

实验十三 大肠杆菌感受态细胞的制备和重组DNA分子的转化 35

实验十四 重组转化子DNA的鉴定（蓝白斑筛选法） 39

实验十五 转化克隆的筛选和鉴定 41

实验十六 工程菌的诱导和酶活性检测 44

实验十七SDS-PAGE电泳 48

第四章 综合大实验 54

实验十八 基因工程综合大实验 54

实验十九 植物基因转化与转基因植株鉴定 57

第五章 基因工程相关的其他实验方法 65

实验二十 限制性片段长度多态性（RFLP）分析 65

实验二十一 免疫印迹法（Western blot）检测蛋白表达 67

第二部分 细胞培养技术 74

第六章 细胞培养的一般操作过程 74

实验二十二 实验器械、器皿的清洗、包装和消毒 74

实验二十三 应用微孔滤膜过滤除菌 78

实验二十四 细胞培养用液的配制 80

实验二十五 小鼠肾脏细胞原代培养 82

实验二十六 动物细胞的传代培养 85

实验二十七 烟草叶片愈伤组织诱导和器官发生 86

实验二十八 培养细胞的冻存与复苏 89

实验二十九 细胞计数 91

实验三十 细胞活力的测定方法 93

实验三十一 动物细胞融合 94

实验三十二MTT法检测细胞相对数和相对活力 97

实验三十三 细胞的基因转染实验——脂质体法 99

第三部分 生物信息学 103

第七章 生物信息学实验 103

实验三十四 生物信息学数据库 103

实验三十五 核酸序列检索 106

实验三十六 原核与真核生物核酸序列分析 109

实验三十七 核酸序列分析和引物设计 120

实验三十八 蛋白质序列分析 130

第四部分 附录 141

第八章 基因工程常用试剂配制及常用数据 141

附录一 基因工程常用试剂配制 141

附录二PCR引物设计时常用Ⅱ型限制性内切酶的酶切位点保护碱基 154

附录三 常用的基因工程型宿主菌的相关信息 157

附录四 基因工程常用数据 159

附录五 常用化学试剂的一般常识 167

附录六 分子生物学综合数据库工具箱 176