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1 绪论 1

1.1 漆酶及其分布 1

1.2 细菌漆酶的性质及结构 11

1.3 细菌漆酶的催化机理 13

1.4 细菌漆酶基因的克隆 16

1.5 细菌漆酶的工业应用 17

1.6 大肠杆菌表达系统 20

1.7 本课题研究内容、目的和意义 27

2 产漆酶细菌的筛选和鉴定 29

2.1 材料 29

2.2 方法 33

2.3 结果与分析 41

2.4 讨论 52

2.5 本章小结 54

3 芽孢漆酶的酶学性质 55

3.1 材料 55

3.2 方法 56

3.3 结果与分析 60

3.4 讨论 81

3.5 本章小结 85

4 芽孢漆酶在染料脱色中的应用 86

4.1 材料 86

4.2 方法 88

4.3 结果与分析 89

4.4 讨论 106

4.5 本章小结 109

5 细菌芽孢漆酶的固定化及其应用 111

5.1 材料 111

5.2 方法 112

5.3 结果与分析 118

5.4 讨论 124

5.5 本章小结 125

6 芽孢漆酶基因的克隆及序列分析 127

6.1 材料 127

6.2 方法 128

6.3 结果与分析 133

6.4 讨论 156

6.5 本章小结 158

7 芽孢漆酶基因在大肠杆菌中的表达 160

7.1 材料 160

7.2 方法 162

7.3 结果与分析 171

7.4 讨论 183

7.5 本章小结 188

8 CotA蛋白的纯化及其酶学特性的研究 190

8.1 材料 190

8.2 方法 193

8.3 结果与分析 200

8.4 讨论 208

8.5 本章小结 209

结论 211

参考文献 217

附录 231

附录1 筛选菌株16S rDNA测序结果 231

附录2 筛选菌株漆酶基因测序结果 239

附录3 筛选菌株漆酶的二级结构预测 247

附录4 Bacillus subtilis WD23的CotA基因的核苷酸序列和推导的氨基酸序列 253