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第一部分 生化技术原理 1

第一章 生化分离制备的特点与原理 1

第一节 生化分离制备方法的特点 1

第二节 生化分离制备方法的原理 2

第三节 生化分离制备的分析鉴定方法 3

第四节 生化分离制备中材料提取方法的选择 4

第五节 生化分离制备中分离纯化方法的选择 6

第二章 几种物质的提取分离 7

第一节 蛋白质和酶的提取分离 7

第二节 核酸的提取分离 10

第三节 脂类化合物的提取分离 13

第四节 糖、氨基酸及其他水溶性生化物质的提取分离 14

第五节 植物次生物的提取及溶剂系统分离的选择 14

第三章 生化分离制备中几个最常用的技术 16

第一节 层析分离技术 16

第二节 电泳技术 28

第二部分 实验内容 36

实验一 氨基酸的纸层析法 36

实验二 游离氨基酸总量的测定（茚三酮法） 38

实验三 蛋白质色氨酸含量的直接测定 40

实验四 蛋白质含量的测定（考马斯亮蓝G-250法） 42

实验五 蛋白质等电点的测定 44

实验六 凯氏定氮法测定蛋白质含量 46

实验七 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量 50

实验八 凝胶层析脱盐（SephadexG-25） 54

实验九 植物组织中核酸的提取和测定 57

实验十 酵母核糖核酸的提取 62

实验十一 植物组织中DNA的快速提取 64

实验十二 醋酸纤维薄膜电泳分离核苷酸 66

实验十三 5′-核苷酸定量测定（过碘酸氧化法） 68

实验十四 酶的性质 71

实验十五 淀粉酶活性的测定 74

实验十六 植物过氧化物酶同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳 76

实验十七 过氧化物酶活性的测定 79

实验十八 过氧化氢酶活性的测定 81

实验十九 邻苯三酚自氧化法测定SOD（超氧化物歧化酶）活性 83

实验二十 脲酶Km值简易测定法 85

实验二十一 比色法快速测定淀粉含量 87

实验二十二 总糖和还原糖的测定（菲林氏法） 89

实验二十三 还原糖的快速测定法 92

实验二十四 糖的定量测定（蒽酮法） 94

实验二十五 维生素C含量的测定（2,6-二氯酚靛酚法） 96

实验二十六 维生素E含量的测定 98

实验二十七 维生素B2（核黄素）含量的测定（荧光法） 100

实验二十八 粗脂肪含量的测定（残余法） 102

实验二十九 脂肪酸纸层析法 104

实验三十 游离脂肪酸含量的快速测定 106

实验三十一 PCR技术 107

附录 109

一、实验室规则 109

二、实验室基本操作 109

（一）玻璃仪器的洗涤 109

（二）搅拌和振荡 110

三、常用仪器的使用 110

（一）容量玻璃仪器的使用方法 110

（二）台秤 112

（三）分光光度计 112

（四）电动离心机 114

（五）干燥箱和恒温箱 115

（六）电热恒温水浴 115

附表Ⅰ 常用缓冲液的配制 116

附表Ⅱ 市售酸碱的密度和浓度 119

附表Ⅲ 常用基准物质的干燥温度和应用范围 119

附表Ⅳ 酸碱指示剂 120