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基础性实验篇 3

第1章 核酸的分离与纯化技术 3

实验1.1 基因组DNA的提取 3

实验1.2 质粒DNA的提取与纯化 10

实验1.3 总RNA和mRNA的制备 14

第2章 电泳技术 19

实验2.1 DNA琼脂糖凝胶电泳 19

实验2.2 RNA琼脂糖凝胶电泳 23

实验2.3 从低熔点胶琼脂糖凝胶中分离回收DNA片段 25

实验2.4 SDS-聚丙酰胺凝胶电泳 27

第3章 DNA扩增和cDNA文库的构建 32

实验3.1 聚合酶链反应扩增目的DNA 32

实验3.2 cDNA文库的构建 50

实验3.3 定量PCR 57

第4章 重组质粒的连接与转化 62

实验4.1 限制性内切酶的酶切反应 63

实验4.2 外源DNA和质粒载体的连接反应 66

实验4.3 大肠杆菌感受态细胞的制备 68

实验4.4 重组质粒的转化与选择 71

第5章 重组子的筛选与鉴定 74

实验5.1 Southern印迹杂交 75

实验5.2 Northern印迹杂交 78

实验5.3 菌落原位杂交 81

实验5.4 斑点杂交 83

实验5.5 Western印迹杂交 84

综合性实验篇 89

第6章 工程菌的构建、培养与目的产物的分离纯化 89

实验6.1 工程菌的构建 90

实验6.2 高表达工程菌株的筛选与保藏 94

实验6.3 工程菌生长曲线分析 97

实验6.4 重组产物表达影响因素实验 99

实验6.5 工程菌发酵工艺实验 101

实验6.6 表达产物的分离纯化 103

附录 108

附录1 基因工程操作中常用的溶液和缓冲液 108

附录2 培养基与试剂的配制 111

附录3 常用抗生素 119

附录4 常用缩略语 120

附录5 常用仪器设备 123

附录6 梯度PCR仪的介绍及使用说明 125