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第一章　核酸的分离与纯化 1

第一节 真核基因组DNA的分离纯化 1

实验1 蛋白酶K－苯酚抽提法 3

【附】甲酰胺解聚联合透析法 5

实验2　外周血白细胞DNA的提取（NaI法） 6

实验3 小样本中基因组DNA的分离 7

第二节 质粒DNA的分离纯化 9

实验4　裂解法提取质粒DNA 10

实验5 聚乙二醇沉淀法纯化质粒DNA 13

第三节 真核细胞RNA的制备 15

实验6　异硫氰酸胍－酚－氯仿一步（AGPC）法制备总RNA 17

实验7　氯化锂－尿素法制备总RNA 19

实验8 Trizol专用试剂分离RNA 21

实验9　磁珠分离mRNA 22

第二节 PCR反应体系的组成 25

第一节 PCR原理 25

第二章　聚合酶链反应 25

实验10　大肠杆菌的PCR检测 26

实验11 β－肌动蛋白（β-Actin）的RT-PCR检测 28

实验12 乙型肝炎病毒（HBV）实时荧光定量PCR 29

第三章　核酸的鉴定与分析 33

第一节 分光光度法测定核酸的浓度和纯度 33

实验13 紫外分光光度法检测核酸的浓度及纯度 33

实验14 荧光分光光度法检测核酸浓度 34

第二节 核酸凝胶电泳法 36

实验15　DNA的琼脂糖凝胶电泳 39

实验16　RNA的甲醛变性凝胶电泳 41

实验17　非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 44

实验18　变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 47

第三节 核酸杂交技术 50

实验19　Southern印迹 50

【附1】核酸探针标记的方法 56

【附2】杂交反应的条件及参数的优化 62

实验20　Northern印迹 63

【附3】RNA变性电泳方法 65

实验21　斑点及狭缝印迹法 67

实验22　组织细胞内mRNA的原位杂交 70

第四节 DNA测序技术 74

实验23 Sanger双脱氧核苷酸末端终止法 74

【附1】Maxam-Gilbert化学降解法测定DNA序列 79

【附2】DNA序列的自动化测定 82

第四章　基因工程——综合性试验 86

实验24　DNA的限制性酶切反应 87

实验25　DNA片段的回收 90

【附1】SYBR？Green Ⅰ核酸荧光染料——快速而灵敏的核酸检测试剂 92

实验26　DNA的重组连接 93

【附2】可以提高连接效率的化学试剂 95

实验27　感受态细胞的制备（CaCl2法）与转化 96

实验28　重组质粒的筛选与鉴定 98

实验29　外源基因的诱导表达与检测 102

第五章　其他相关的分子诊断技术 109

实验30　PCR－限制性片段长度多态性（PCR-RFLP） 110

实验31　PCR－单链构象多态性分析（PCR-SSCP） 113

实验32　蛋白质印迹技术 116

实验33 等位基因特异的寡核苷酸 120

（PCR-ASO） 120

实验34　甲基化特异性基因扩增 122

实验35　基因芯片 126

【附】分子生物学实验设计与流程 131

参考文献 134

附录一　核酸和蛋白质数据 135

附录二　常用仪器介绍 140

附录三 常用试剂、缓冲液的配制 147

附录四 分子生物学中常用技术 153

附录五 常用词汇的中英文对照 157