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第一章 仪器设备 1

分子生物学实验室常用仪器设备简介 1

第二章 核酸 9

第一节 核酸的构成 9

第二节 基因组DNA的提取 14

第三节 TENS法提取微生物基因组DNA 18

第四节 DNA的扩增 19

第五节 DNA片段的琼脂糖凝胶电泳和回收纯化 21

第六节 DNA重组及鉴定 28

第七节 核酸分子杂交技术 31

第八节 Southern blotting技术 41

第九节 植物总RNA的提取和检测 48

第十节 poly（A）＋RNA的提取 51

第十一节 无菌感染期线虫RNA的提取 51

第十二节 果蝇总RNA的提取 53

第十三节 哺乳动物RNA的提取 54

第十四节 反转录RNA 55

第十五节 半定量PCR技术 56

第十六节 实时荧光定量PCR技术 57

第十七节 Northern bloting技术 59

第十八节 核酸染色 61

第十九节 双脱氧链终止法测序技术 64

第二十节 焦磷酸测序（Pyrosequencing） 66

第二十一节 核酸信息分析 68

第三章 蛋白质 80

第一节 定量蛋白质组学 84

第二节 植物蛋白的提取 85

第三节 动物蛋白质的提取 88

第四节 动物细胞器蛋白的提取 89

第五节 细菌蛋白质的提取 93

第六节 原核表达 94

第七节 用IPTG诱导大肠杆菌表达重组绿色荧光蛋白 98

第八节 蛋白质的定量 99

第九节 聚丙烯酰胺变性凝胶电泳 104

第十节 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 108

第十一节 双向凝胶电泳 110

第十二节 Western bolting技术 114

第十三节 蛋白质转印实验半干式 116

第十四节 蛋白质转印实验电泳液式 118

第十五节 蛋白质染色 119

第十六节 染色质免疫沉淀技术（ChIP） 121

第十七节 凝胶迁移实验（EMSA） 125

第十八节 超迁移EMSA（Super-Shift EMSA） 129

第十九节 蛋白质序列分析 131

第四章 载体构建及扩繁 132

第一节 DNA限制性内切酶酶切分析 132

第二节 PCR产物连接 135

第三节 连接产物的转化 136

第四节 挑菌与摇菌 140

第五节 保菌 141

第六节 菌液PCR检测 141

第七节 质粒提取 142

第八节 质粒DNA的电泳检测 145

第九节 ABI3730XL测序实验程序 146

第十节 感受态细胞的制备 151

第十一节 农杆菌转化法 152

第十二节 基于毛细管电泳的荧光检测SSR实验程序 153

第五章 蛋白质—蛋白质相互作用 156

第一节 目标蛋白的亚细胞定位 156

第二节 酵母双杂交 160

第三节 酵母文库的筛选 164

第四节 免疫共沉淀 165

第五节 GST融合蛋白进行Pulldow实验 168

第六节 双分子荧光互补（BiFC） 169

第七节 荧光共振能量转移［Fluorescence resonance energy transfer（FRET）］ 175

第八节 Far Western blotting印迹法 176

第九节 酵母单杂交实验 179

第十节 原生质体提取及转化步骤 180

第六章 作物转化 183

第一节 浸蘸法转化拟南芥 185

第二节 农杆菌侵染法转化烟草 187

第三节 烟草瞬时表达 190

第四节 农杆菌侵染法水稻 191

第五节 生理指标的测定 193

第七章 常用试剂的配制 197

第一节 抗生素溶液的配制 197

第二节 常用缓冲液的配制 198

第三节 常用培养基的配制 207

参考文献 211