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上篇 生物化学研究技术原理 1

第一章 生物化学制备技术概论 1

第一节 生化分离制备方法的特点 1

第二节 溶剂提取法 2

第三节 沉淀法 3

第四节 膜分离技术 6

第五节 浓缩与干燥 8

第二章 离心 9

第一节 离心技术基本原理与设备 9

第二节 制备超离心方法 15

第三节 超速离心技术在生化研究中的应用 16

第三章 层析 20

第一节 层析概述 20

第二节 凝胶层析 21

第三节 离子交换层析 24

第四节 纸层析 28

第五节 薄层层析 30

第六节 聚酰胺薄膜层析 32

第七节 亲和层析 33

第八节 气相色谱原理及其在生化研究中的应用 39

第九节 高压液相色谱原理及其在生化研究中的应用 41

第四章 电泳 43

第一节 电泳的基本原理 43

第二节 影响电泳的主要因素 44

第三节 聚丙烯酰胺凝胶电泳 45

第四节 琼脂糖凝胶电泳 51

第五节 电泳及配套技术的新进展 53

第五章 酶的分离、纯化及活力测定 56

第一节 材料的选择和处理 57

第二节 酶的提取、分离与纯化 58

第三节 酶活力的测定 61

第六章 同工酶分析 63

第一节 同工酶概述 63

第二节 同工酶的分析与鉴定 64

第三节 同工酶分析技术的应用 66

第七章 植物主要成分分析 68

第一节 试样的采集和处理 68

第二节 水分分析 69

第三节 碳水化合物的分析 72

第四节 蛋白质的分析 79

第五节 核酸的分析 87

第六节 脂质分析 91

第八章 蛋白质序列分析 92

第一节 蛋白质序列分析的基本战略 93

第二节 蛋白质序列分析的一般方法和步骤 95

第三节 氨基酸组成分析 97

第四节 蛋白质的裂解 101

第五节 末端氨基酸残基的测定 105

第六节 手工微量序列测定技术 107

第七节 蛋白质自动序列分析仪 110

第八节 二硫键及其位置的确定 111

第九章 核酸的制备与分析 111

第一节 DNA的制备及分析 111

第二节 RNA的制备与分析 121

第三节 DNA的顺序分析 124

第四节 DNA的体外扩增——PCR技术 132

第一节 克隆载体 136

第十章 DNA重组技术 136

第二节 DNA和RNA的酶学操作 144

第三节 cDNA文库的构建与筛选 159

第四节 重组DNA导入寄主细胞 165

第十一章 免疫化学技术 170

第一节 概述 170

第二节 抗原与抗体 171

第三节 免疫途径 171

第四节 免疫反应测定方法 173

第五节 免疫化学技术的应用 176

第十二章 放射性同位素示踪技术 178

第一节 基本知识 178

第二节 放射性的测量 180

第三节 射线的剂量与卫生防护 183

第四节 放射性同位素示踪技术在生化领域中的应用 184

下篇 生物化学实验 187

第一单元 成分分析 187

实验一 谷物及植物材料中还原糖、可溶性糖及淀粉含量分析 187

实验二 谷物脂肪含量及脂肪酸组分分析 189

实验三 谷物蛋白氮和非蛋白氮的测定 191

实验四 植物组织中金属元素的测定 193

第二单元 蛋白质 196

实验五 谷物种子蛋白质的分级分离 196

实验六 蛋白质分子量的测定（SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法） 198

实验七 聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦法测定蛋白质等电点 200

实验八 蛋白质的双向电泳 202

实验九 蛋白质N-末端的测定（DNS法） 204

实验十 蛋白质C-末端的测定（肼解法） 207

实验十一 种子蛋白氨基酸组分分析 208

实验十二 亲和层析法提纯麦胚凝集素 209

第三单元 酶 214

实验十三 苹果酸脱氢酶的纯化与活力测定 214

实验十四 硝酸还原酶的离体测定 216

实验十五 脲酶Km值的测定 218

实验十六 酸性磷酸酯酶的动力学测定 221

实验十七 植物过氧化物酶同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳 223

第四单元 核酸 225

实验十八 植物组织中DNA的分离 225

实验十九 叶绿体DNA的分离及纯化 229

实验二十 线粒体DNA的分离及纯化 232

实验二十一 碱性SDS法提取大肠杆菌质粒DNA 235

实验二十二 ECoRI酶切质粒DNA及Southern转移 238

实验二十三 DNA的分子杂交 240

实验二十四 植物mRNA的分离与纯化 246

实验二十五 RNA的碱基组成分析 248

第五单元 代谢 251

实验二十六 光合磷酸化反应活力的测定 251

第六单元 免疫化学技术 253

实验二十七 单向免疫扩散 253

实验二十八 双向免疫扩散试验 255

实验二十九 对流免疫电泳 256

实验三十 单向火箭免疫电泳 257

实验三十一 酶联免疫间接法测定抗体 258

实验三十二 酶联免疫双抗体夹心试验 261

附录： 262

参考文献 276