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实验1基因组DNA的提取 1

实验1.1植物基因组DNA的提取 2

实验1.2动物基因组DNA的提取 3

实验1.3细菌基因组DNA的提取 4

实验1.4酵母菌基因组DNA的提取 5

实验2总RNA和mRNA的提取 8

实验2.1 Trizol法提取总RNA 9

实验2.2异硫氰酸胍/酚一步法提取总RNA 10

实验2.3总RNA提取试剂盒 11

实验2.4 mRNA的分离纯化 12

实验3质粒DNA的提取 15

实验3.1碱裂解法少量提取质粒DNA 17

实验3.2少量质粒提取试剂盒 19

实验4目的基因的获得 21

实验4.1 PCR扩增 26

实验4.2反转录PCR 27

实验5限制性内切酶的酶切反应 30

实验5.1 pUC18/19质粒DNA的EcoRI单酶解 32

实验5.2 Hind ⅢⅢ和Sal I对pUC18/19质粒DNA的双酶切 33

实验6凝胶电泳法进行DNA的分离和纯化 35

实验7 DNA片段的体外连接 37

实验8大肠杆菌感受态细胞的制备 40

实验9重组子的转化 42

实验10菌落PCR筛选阳性重组子 45

实验11重组质粒的酶切鉴定 47

实验12外源基因在大肠杆菌中的诱导表达 49

实验13基因表达产物的检测分析：SDS-PAGE 53

实验14 Western Blotting（蛋白免疫印记）实验 59

实验15 Southern印迹实验 63

实验16全长cDNA文库的构建 68

实验17凝胶阻滞实验 78

实验18染色质免疫共沉淀技术 82

参考文献 87

附录一 基因工程实验中的常用数据和换算关系 89

附录二 基因工程实验常用试剂、溶液和缓冲液 92

附录三PCR实验引物设计原则 95