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第1章 核酸分离提取技术 1

引言 1

第1节 碱裂解法提取质粒DNA 1

第2节 磁珠法提取质粒DNA 4

第3节 质粒DNA琼脂糖凝胶电泳及其胶回收 7

第4节 E.coli基因组DNA的提取 10

第5节 RNA的分离提取 14

参考文献 18

第2章 PCR及实时荧光定量PCR技术 19

引言 19

第1节 DNA序列的PCR扩增 19

第2节 实时荧光定量PCR技术测定目标DNA含量 24

参考文献 40

第3章 基因工程菌的构建与表达产物鉴定技术 41

引言 41

第1节 E.coli感受态细胞的制备、质粒DNA重组与转化 41

第2节 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质 45

第3节 蛋白质的Western印迹分析 50

参考文献 56

第4章 基因工程蛋白的工程化生产技术 57

引言 57

第1节 基因工程蛋白的原核表达工程化技术 58

第2节 原核表达基因工程蛋白的分离纯化 68

第3节 基因工程蛋白的真核表达工程化技术 75

第4节 真核表达基因工程蛋白的分离纯化 82

参考文献 88

第5章 基因定点突变、基因敲除及微生物分子生物学鉴定技术 89

引言 89

第1节 基因定点突变技术 89

第2节 基于RecA同源重组的基因敲除技术 94

第3节 基于16S rRNA序列分析等相关技术鉴定微生物 107

参考文献 119

第6章 蛋白质双向电泳、质谱鉴定及结晶技术 120

引言 120

第1节 蛋白质双向电泳 120

第2节 蛋白质的质谱鉴定 131

第3节 蛋白质表达、纯化与结晶 138

参考文献 151

第7章 生物信息学网络资源利用 152

引言 152

第1节 生物信息数据库 152

第2节 核酸与蛋白质序列分析 158

参考文献 163

附录 164

附录Ⅰ实验报告撰写方法 164

附录Ⅱ实验室安全守则 165

附录Ⅲ培养基与试剂配制 166