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第一篇 生物化学与分子生物学实验基本知识 2

第一章 生物化学与分子生物学实验室规则与基本要求 2

一、实验室规则 2

二、实验记录及实验报告的书写 3

三、实验误差的产生及提高实验准确度的方法 4

第二章 生物化学与分子生物学实验基本操作 8

一、玻璃器皿的洗涤与清洁 8

二、常用玻璃仪器的使用 9

三、移液器的选择与使用 11

四、安全注意事项及意外事故的处理 12

第二篇 生物化学与分子生物学基本实验技术及原理 14

第三章 分光光度技术 14

一、基本原理 14

二、技术分类 16

三、仪器基本构造 16

四、常用分光光度计及使用方法 17

第四章 电泳技术 20

一、基本原理 20

二、常用电泳技术 21

三、电泳的影响因素 23

四、电泳可能遇到的问题及解决办法 24

第五章 层析技术 26

一、基本原理 26

二、层析分类 27

三、柱层析的基本过程 31

第六章 离心分离技术 32

一、基本原理 32

二、离心机的主要构造和类型 33

三、离心方法 35

四、离心操作的注意事项 37

第七章 生物大分子制备技术 38

一、生物材料的选择 39

二、组织细胞破碎与细胞器分离 40

三、生物大分子的提取 41

四、生物大分子的分离纯化 42

五、提纯后的处理 49

第八章 核酸分子杂交 51

一、基本原理 51

二、探针 51

三、杂交滤膜 52

四、杂交条件 52

五、常见分子杂交的种类 53

第九章 重组DNA技术 54

一、目的DNA片段的取得 54

二、DNA片段和载体的连接 54

三、导入宿主细胞 55

四、筛选 55

五、基因表达 55

第十章 聚合酶链反应（PCR） 57

一、基本原理 57

二、基本步骤 57

三、几种重要的PCR衍生技术 57

四、影响因素 58

第十一章 细胞培养技术 61

一、细胞培养的基本设备及准备工作 61

二、细胞培养用液及培养基（液） 65

三、细胞培养的基本技术 68

第三篇 生物化学与分子生物学实验 72

第十二章 理论验证实验 72

实验一 蛋白质含量测定 72

一、双缩脲法测定蛋白质浓度 72

二、Folin－酚试剂法（Lowry法）测定蛋白质浓度 73

三、紫外分光光度法测定蛋白质浓度 74

四、考马斯（Comessie）亮蓝结合法测定蛋白质浓度 75

五、BCA法测定蛋白质浓度 76

实验二 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 77

实验三 维生素C含量测定 79

一、总维生素C含量测定——2，4-二硝基苯肼法 79

二、还原型维生素C含量测定 81

实验四 脲酶Km值简易测定 82

实验五 激素对血糖浓度的影响 84

实验六 血清谷丙转氨酶（ALT）活性测定（赖氏法） 87

实验七 血清总胆固醇的测定 88

一、硫磷铁法 88

二、血清总胆固醇的测定（邻苯二甲醛法） 90

三、血清胆固醇的定量测定（醋酸酐法） 91

实验八 血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 92

实验九 SDS-PAGE测定蛋白质的分子量 93

实验十 DNA琼脂糖凝胶电泳 96

实验十一 聚合酶链反应（PCR）体外扩增DNA 98

实验十二 质粒DNA的提取、制备与检测 101

第十三章 综合分析实验 104

实验一 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 104

实验二 血清清蛋白的分离、提纯和定量 106

实验三 组织DNA与RNA的分离、提纯和定量 109

实验四 血清高密度脂蛋白中胆固醇的测定 112

实验五 细胞基因组DNA的提取与检测 114

一、细胞基因组DNA的提取 114

二、提取DNA鉴定 115

三、DNA分子量大小鉴定 116

实验六 反转录聚合酶链反应（RT-PCR） 116

实验七 DNA的限制性酶切与琼脂糖凝胶电泳 119

实验八 DNA重组实验 121

实验九 重组克隆的筛选 124

实验十 蛋白质免疫印迹分析（Western blot） 126

实验十一 Southern印迹杂交 130

实验十二 Northern印迹杂交 133

第十四章 创新性实验 137

实验一 蛋白质或酶的分离纯化 137

实验二 饥饿和饱食对肝糖原含量的影响 137

实验三 乙型肝炎病毒DNA的检测 138

实验四 血清（浆）过氧化脂质测定 138

实验五 血友病的分子诊断 139

实验六 RNA干扰技术靶向沉默目的基因 140

第十五章 设计性实验 141

实验一 组织蛋白的提取及含量测定 141

实验二 天然产物中多糖的提取、纯化与鉴定 142

实验三 蛋白质的表达、分离、纯化和鉴定 143

设计方案Ⅰ 蛋白质的表达、分离、纯化 144

设计方案Ⅱ 蛋白质的鉴定 145

实验四 比较不同组织中DNA的含量和纯度 147

实验五 蛋白质的两性反应和等电点测定 147

实验六 血清中胆固醇及甘油三酯的测定 148

设计方案Ⅰ 血清甘油三酯简易测定法 148

设计方案Ⅱ 血清甘油三酯的测定（GPO-PAP法） 149

参考文献 152