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第一部分 分子生物学实验基础知识 2

第1章 分子生物学实验室规则和安全 2

1.1 实验室一般规则 2

1.2 实验室常识 2

1.3 实验室安全基础知识 3

1.4 实验室合理设计和布局 4

1.5 实验室急救 4

1.6 废弃物、放射性物质及有毒物质的处理 5

第2章 分子生物学实验常用仪器设备及其操作 7

2.1 分子生物学实验常用仪器设备 7

2.2 冷冻离心机 8

2.3 电泳仪 9

2.4 分析天平 10

2.5 分光光度计 10

2.6 数字式酸度计 11

2.7 PCR仪 12

2.8 凝胶成像系统 13

2.9 摇床 13

2.10 水的净化装置 14

2.11 消毒设备 15

第3章 细菌培养常用培养基和抗生素溶液的配制方法 17

3.1 常用培养基的配制方法 17

3.2 常用抗生素溶液的配制方法 18

第4章 GenBank数据库简介 20

4.1 概述 20

4.2 GenBank的建立与发展 20

4.3 GenBank的检索 22

4.4 GenBank数据库结构 23

第二部分 分子生物学常用实验技术 32

第5章 核酸的制备 32

5.1 核酸制备的原理与方法 32

5.2 质粒的生物学特性 35

5.3 常用克隆载体的特征 37

实验1 真核生物基因组DNA提取 38

实验2 总RNA的提取及鉴定 40

实验3 质粒DNA的微量提取和鉴定 44

第6章 DNA的酶切和凝胶电泳 47

6.1 限制性核酸内切酶的特性及应用 47

6.2 琼脂糖凝胶电泳 49

6.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳 51

实验4 DNA的限制性核酸内切酶酶切及凝胶电泳 53

第7章 DNA转化 57

7.1 感受态细胞的制备 57

7.2 转化 57

实验5 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 59

第8章 DNA重组的基本流程和方法 64

8.1 目的基因的获取 64

8.2 DNA分子的体外重组 65

8.3 DNA重组体的导入 66

8.4 受体细胞的筛选 68

8.5 基因表达 69

实验6 DNA片段的黏性末端连接法 70

实验7 DNA片段的黏-平端连接法 71

实验8 重组子的筛选与鉴定 73

第9章 聚合酶链式反应技术 76

9.1 常规PCR技术的原理及操作 76

9.2 引物设计原则及合成 80

9.3 PCR产物的纯化与鉴定 81

实验9 PCR扩增特异性DNA片段及扩增产物的纯化与鉴定 83

第10章 核酸杂交技术 86

10.1 几种核酸探针标记方法 86

10.2 核酸探针制备和纯化技术 89

实验10 核酸探针制备和纯化 97

实验11 菌落原位杂交法 99

第三部分 分子生物学综合性、研究性实验 104

第11章 外源基因的表达 104

11.1 外源基因在原核生物中的表达 104

11.2 外源基因在酵母细胞中的表达 111

实验12 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达 116

实验13 SDS-PAGE电泳检测表达的外源蛋白 117

实验14 脂肪酶基因在枯草杆菌中表达及表达产物的研究 119

实验15 外源基因在酵母细胞中表达及表达产物的研究 121

第12章 利用分子生物学技术进行细菌的种属鉴定 123

12.1 微生物分类鉴定方法的发展 123

12.2 16S rDNA分类鉴定技术的原理 124

实验16 利用16S rDNA序列分析技术进行细菌种属的鉴定 125

第13章 基因表达差异的分析 130

13.1 差减杂交 130

13.2 mRNA差异显示技术 131

13.3 cDNA示差分析 131

13.4 差减抑制杂交方法 132

实验17 半定量RT-PCR技术检测基因的表达差异 133

附录 138

附录A 常用单位及换算方法 138

附录B 常用核酸、蛋白质换算数据 138

附录C 核酸的单位及有关数据 139

附录D 常见核酸分子的长度和相对分子质量 139

附录E 色素在聚丙烯酰胺凝胶中的移动参数 140

参考文献 141