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第一部分 生物化学实验指导 3

第一章 常用生物化学实验技术原理 3

第一节 分光光度法 3

第二节 层析法 13

第三节 电泳法 41

第四节 离心分离法 60

第二章 生物化学基础实验 66

实验一 糖的显色反应和定性鉴定 66

实验二 总糖的测定（1）——3，5-二硝基水杨酸比色定糖法 68

总糖的测定（2）——蒽酮比色法 71

实验三 蛋白质的两性反应和等电点的测定 72

实验四 蛋白质的沉淀及变性实验 74

实验五 蛋白质的呈色反应 76

实验六 考马斯亮蓝G-250染色法测定蛋白质含量 78

实验七 血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 80

实验八 紫外光谱吸收法测定蛋白质含量 81

实验九 影响酶活性的因素 82

实验十 酶的特异性 84

第三章 生物化学大实验 86

实验十一 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质 86

实验十二 离子交换层析法分离氨基酸 89

实验十三 氨基酸的分离——纸层析法 92

实验十四 粗脂肪的提取和定量测定 95

实验十五 大蒜细胞SOD的提取与分离 97

实验十六 淀粉酶活力的测定 100

实验十七 果蔬维生素C含量的测定 103

实验十八 脂肪的碱水解及组分鉴定 105

实验十九 植物材料中总黄酮的提取与测定 107

实验二十 可溶性糖的硅胶G薄层层析 109

实验二十一 糖酵解中间产物的鉴定 112

实验二十二 碱性磷酸酶Km的测定 114

实验二十三 卵清蛋白的分段盐析、透析 117

实验二十四 碘值的测定 119

实验二十五 乳酸脱氢酶粗提液的制备和活力测定 121

实验二十六 糖的酵解作用 124

实验二十七 转氨基作用 127

第二部分 分子生物学实验指导 133

第四章 分子生物学实验一般原理 133

第一节 分子生物学概述 133

第二节 载体 136

第三节 分子生物学中常用的工具酶 147

第四节 基因组文库和cDNA文库的构建 152

第五节 DNA重组与鉴定 156

第六节 PCR基因扩增 162

第七节 DNA序列测定 175

第八节 外源基因的蛋白表达 183

第五章 学生实验（综合性、设计性实验） 194

实验一 总DNA的提取 194

实验二 琼脂糖凝胶电泳检测DNA 199

实验三 PCR扩增及扩增产物的回收 201

实验四 DNA重组 204

实验五 CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞 207

实验六 重组质粒的转化及筛选 209

实验七 质粒DNA的提取及其定性定量分析 212

实验八 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达和检测 215

实验九 重叠延伸PCR介导的定点突变 220

实验十 探针制备和Southern Blot 223

Ⅰ 核酸探针的制备 224

Ⅱ DNA杂交 225

实验十一 反向PCR 229

实验十二 总RNA提取和Northern Blot 232

Ⅰ 植物总RNA提取 233

Ⅱ RNA杂交 235

实验十三 反转录PCR和RACE 239

Ⅰ 反转录PCR（RT-PCR） 239

Ⅱ RACE 243

附录 250

参考文献 272