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第一章绪论 1

一、目的和意义 1

目 录 1

二、培养基 2

三、培养条件 3

四、培养物菌龄 8

五、纯培养 8

第二章定期移植保藏法 9

一、说明 9

二、设备 9

三、方法与步骤 10

四、保存 11

五、优缺点 12

（一）原理 13

第三章冷冻真空干燥法 13

一、说明 13

（二）条件要求 15

二、设备 15

（一）冷冻真空干燥装置和真空熔封装置 15

（二）安瓿管 18

（三）保护剂 19

三、方法与步骤 19

（一）安瓿管及保护剂的准备 19

（二）菌种的培养和细胞悬浮液的制备 20

（三）分装 20

（四）冷冻真空干燥 21

（一）失重法 23

（五）真空下密封 23

四、冻干样品含水量的测定 23

（二）Karl Fisher氏化学滴定法 24

五、保存 26

六、复苏培养 28

七、冷冻真空干燥保藏菌种制作程序流程图 28

八、影响生物存活的因素 29

（一）生物的类别 30

（二）培养条件和菌龄 31

（三）悬浮液的浓度 31

（四）保护剂 32

（五）冻结 33

（七）真空度 34

（六）干燥程度 34

（八）保存条件 35

（九）复苏培养 35

第四章L－干燥法 36

一、说明 36

二、设备 36

三、保护剂 37

四、方法与步骤 38

五、保存 39

六、复苏培养 40

七、L－干燥其他制备法 40

（一）Annear氏法 40

（三）IFO法 41

（二）NCIB法 41

八、效果 42

第五章液氮超低温冻结保藏技术 44

一、说明 44

（一）低温生物学中所遇到的几个温度范围 45

（二）冻结和解冻 45

（三）低温对生物膜的影响 49

（四）冻结和解冻后细胞存活力 49

（五）冻结损伤的机理 51

二、设备 52

（一）液氮发生器 52

（二）液氮贮存罐 52

（三）液氮生物贮存罐 52

（四）控制冷却速度装置 53

（五）安瓿瓶 56

（六）铝夹 56

三、低温保护剂 57

四、慢速冻结与快速冻结 58

五、方法与步骤 59

（一）准备工作 60

（二）细胞悬浮液的制备 60

（三）分装 61

（四）冻结 61

（五）保存 61

六、解冻及复苏培养 61

七、防护 62

二、设备 64

第六章矿油封藏法 64

一、说明 64

三、方法与步骤 65

四、注意事项 66

第七章其他干燥保藏法 68

一、砂或土壤保藏法 68

二、明胶片保藏法 70

三、袋装薄片干燥法 71

四、梭氏（Sordelli）干燥保藏法 72

五、硅胶保藏法 73

六、麸皮保藏法 75

七、滤纸保藏法 76

一、说明 78

第八章蒸馏水或其他溶液保藏法 78

二、方法与步骤 79

第九章重要微生物菌种的培养条件和保藏法 80

一、细菌 80

二、放线菌 83

三、酵母菌 87

四、小型丝状真菌 89

五、担子菌 96

附录Ⅰ 培养基 97

附录Ⅱ 保护剂 109

附录Ⅲ低温保护剂 110

参考文献 111