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第一章 概述 1

第一节microRNA的发现历程 1

第二节microRNA的起源与加工成熟 2

第三节microRNA的特征和鉴别 9

第四节microRNA的调控机理 11

第五节microRNA的功能 14

第六节microRNA、siRNA、piRNA及其他非编码RNA 19

参考文献 25

第二章microRNA的生物信息学研究方法 31

第一节microRNA的生物信息学分析策略概述 31

第二节microRNA序列信息的获取及相关数据库的建立 32

第三节microRNA簇的分析策略 41

第四节microRNA的种系发育分析 47

第五节microRNA基因的转录调控分析 49

参考文献 69

第三章microRNA的分子生物学研究方法 71

第一节microRNA表达分析方法 71

第二节microRNA体外或体内水平的过表达研究 75

第三节microRNA表达抑制研究 76

第四节 体外验证microRNA作用的靶基因 77

第五节microRNA功能研究的策略 78

参考文献 79

第四章microRNA新基因的预测、克隆鉴定及注册 84

第一节microRNA新基因的预测及注册程序 84

第二节microRNA新基因的克隆及鉴定方法 87

参考文献 100

第五章microRNA表达分析方法 103

第一节microRNA基因芯片分析 103

第二节microRNA PAGE/Northern Blot分析 113

第三节microRNA的实时定量PCR检测 120

第四节microRNA LNA-ISH原位杂交 130

参考文献 134

第六章microRNA表达的干预方法——过表达 139

第一节 化学合成的microRNA mimics 139

第二节 真核系统过表达——非病毒载体瞬时表达载体的构建 140

第三节microRNA腺病毒过表达系统 142

第四节microRNA的慢病毒过表达系统 148

参考文献 155

第七章microRNA表达的干预方法——表达抑制 157

第一节 反义核酸分子的抑制策略——化学合成的microRNA抑制剂 157

第二节 基因水平的抑制策略 161

第三节 基于病毒表达系统的microRNA抑制策略 162

参考文献 167

第八章 靶基因预测分析及萤光素酶双报告基因系统验证 170

第一节 生物信息学预测——microRNA靶基因分析软件的设计及使用 170

第二节 萤光素酶双报告基因系统的应用 184

参考文献 194

第九章microRNA研究方法在肝细胞癌研究中的应用 197

第一节microRNA-21在肝细胞癌中的功能研究简介 197

第二节microRNA-21在肝细胞癌中的功能研究所用实验材料与方法 198

第三节miR-21在肝细胞癌发生过程中的表达分析及功能研究 211

第四节miR-21在肝细胞癌发生及发展过程中的作用机制研究 216

第五节miR-21通过调控不同的靶基因在肝细胞癌发生过程中所发挥的功能研究 223

第六节miR-21对重要信号通路及功能基因的影响 229

第七节microRNA在肿瘤研究中的分析与展望 231

参考文献 234