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分子生物学实验室安全规则 1

1．实验室药品试剂使用的注意事项 1

2．处理生物类废弃物的基本方法 4

3．实验室易制毒化学品 5

分子生物学实验室常规设备简介 7

1．实验室操作及分析仪器室 7

2．离心机室 9

3．细胞培养室 9

4．细菌培养室 10

5．放射性核素操作室 11

6．暗室 11

7．其他设备 12

分子生物学常用实验技术 13

1．电泳 13

1.1 琼脂糖凝胶电泳 13

1.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳 18

2．哺乳动物外周血白细胞高分子质量DNA的提取 26

2.1 硅基质膜吸附柱法 26

2.2 NH4Ac-核酸沉淀法 28

3．核酸浓度测定 31

3.1 紫外线分光光度法（紫外线吸收法） 31

3.2 溴乙锭-琼脂糖凝胶电泳法（荧光光度法） 32

4．限制性核酸内切酶消化DNA 35

5．凝胶电泳回收DNA（柱回收法） 40

6．DNA分子的体外连接 43

7．感受态细胞制备及大肠埃希菌转化 47

8．重组质粒的筛选和鉴定 50

8.1 插入失活 50

8.2 α互补（蓝-白筛选） 51

8.3 酶切鉴定 52

9．质粒DNA的提取与纯化（碱裂解法） 55

10．Southern印迹杂交 58

11．探针标记和核酸分子杂交 62

11.1 利用32P标记DNA探针进行核酸分子杂交分析 62

11.2 采用地高辛标记DNA探针进行核酸分子杂交分析 70

12．细胞总RNA的提取 74

12.1 哺乳动物细胞RNA的提取 74

12.2 TRIzol试剂提取哺乳动物细胞RNA 76

12.3 哺乳动物细胞RNA提取（离心柱型） 77

12.4 植物总RNA的提取 78

13．Northern印迹杂交 80

14．PCR和RT-PCR 83

15．实时荧光定量PCR 90

16．DNA定点诱变技术 96

17．PCR-SSCP分析 101

18．细胞蛋白质提取 106

18.1 细胞总蛋白提取 106

18.2 胞浆、胞核蛋白提取 107

19．外源基因在大肠埃希菌中表达和蛋白质纯化 109

20．蛋白质浓度测定（BCA法） 111

21．蛋白质免疫印迹法 114

22．细胞培养 119

22.1 细胞原代培养 119

22.2 细胞传代培养 120

22.3 培养用品的清洗和消毒灭菌 123

22.4 细胞计数方法和细胞活力鉴定方法 124

23．细胞转染 126

23.1 磷酸钙转染法 126

23.2 脂质体转染法 128

24．细胞增殖检测 131

24.1 细胞生长曲线 131

24.2 CCK-8测定细胞活力 132

24.3 细胞集落形成实验 133

25．细胞凋亡检测 136

25.1 常规琼脂糖凝胶电泳 136

25.2 Annexin-V/PI法检测细胞凋亡 139

26．流式细胞术检测细胞周期 141

27．细胞划痕实验 144

28．细胞Transwell侵袭实验 146

29．双荧光素酶服告基因实验 148

30．RNA干扰技术 151

30.1 siRNA干扰技术 151

30.2 慢病毒干扰技术 154

31．染色质免疫共沉淀技术（ChIP） 157

32．凝胶迁移阻滞实验（EMSA） 165

33．DNase Ⅰ足纹分析法 173

34．RNA免疫共沉淀（RIP） 177

35．蛋白质的相互作用 185

35.1 免疫共沉淀 185

35.2 酵母双杂交法 187

36．GST pull-down实验 192

37．细胞免疫荧光染色 195

38．免疫组化 199

39．激光共聚焦荧光显微镜检测技术 202

40．基因启动子区CpG岛预测及甲基化PCR引物设计 204

41．甲基化特异性PCR 212

42．miRNA的提取和富集 216

42.1 常规分离方法 216

42.2 硅基质离心柱法 219

43．miRNA靶基因的生物信息学预测 222

43.1 常用miRNA靶基因预测软件简介 222

43.2 预测软件使用 227

44．文库构建 237

44.1 基因组DNA文库构建 237

44.2 cDNA文库构建 243

44.3 文库的筛选与鉴定 250

45．常用生物信息学数据库 257

45.1 常用核酸序列数据库 257

45.2 常用蛋白质序列数据库 262

46．核酸序列分析 268

46.1 序列比对 268

46.2 开放阅读框分析 271

46.3 限制性核酸内切酶酶切位点分析 273

46.4 基序的查找 274

46.5 外显子、内含子剪切位点分析 275

47．蛋白质序列分析 277

47.1 蛋白质的理化性质分析 277

47.2 蛋白质的疏水性分析 278

47.3 蛋白质的跨膜结构分析 280

47.4 信号肽的预测和识别 283

47.5 蛋白质的卷曲螺旋预测 284

47.6 磷酸化位点的预测与识别 285