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第一部分 生命科学实验技术原理第一章　电泳技术 1

第一节　概述 1

第二节　电泳的基本原理 2

第三节　区带电泳技术 7

第四节　染色方法 23

第二章　层析技术 29

第一节　概述 29

第二节　层析技术的基本理论 31

第三节　层析定性与定量分析 38

第四节　常用的层析方法 41

第三章　分光光度法 54

第一节　概述 54

第二节　光吸收的基本规律 57

第三节　分光光度计的构造和类型 58

第四节　定性、定量方法及其应用 61

第五节　双波长分光光度计及其测定方法 62

第四章　超离心技术 66

第一节　概述 66

第二节　超离心分离方法 70

第三节　密度梯度液的制备和区带收集 75

第四节　制备超离心机做沉淀分析 79

第五章　生物大分子的分离纯化与鉴定 80

第一节　生物大分子制备的前处理 80

第二节　分离纯化 82

第三节　生物大分子的浓缩、干燥和保存 83

第四节　生物大分子含量的测定和纯度鉴定 85

第六章　放射性同位素示踪技术 87

第七章　酵母双杂交技术 96

第八章　DNA重组技术 100

第九章　核酸分子杂交技术 110

第十章　聚合酶链反应技术 122

第二部分　实验内容 124

第十一章　生物化学实验 124

实验一　血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳 124

实验二　血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳 126

实验三　圆盘电泳分离LDH同工酶 129

实验四　氨基酸双向纸层析 132

实验五　动物组织DNA的提取和鉴定 134

实验六　动物组织RNA的提取和鉴定 136

实验七　影响酶活性的因素 137

实验八　胡萝卜素的柱层析分离 144

实验九　肝糖原的提取鉴定与定量 145

实验十　血糖浓度的测定与胰岛素、肾上腺素对血糖浓度影响 147

实验十一　运动后血中乳酸含量的变化 149

实验十二　血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 151

实验十三　血清总胆固醇测定（磷硫铁法） 152

实验十四　琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制 153

实验十五　氨基酸的薄层层析 154

实验十六　血清丙氨酸氨基转移酶活性测定 155

实验十七　凝胶层析分离血红蛋白与CuSO4 159

实验十八　血清总蛋白的测定及标准曲线的制作（双缩脲法） 160

实验十九　血清尿素氮的测定 162

实验二十　3H-胸苷掺入DNA的试验 163

实验二十一　32P掺入磷脂的试验 164

第十二章　分子生物学与基因工程实验 167

实验一　质粒DNA的微量快速提取 167

实验二　质粒DNA的酶切与鉴定 169

实验三　聚合酶链反应技术（PCR） 170

实验四　DNA重组与鉴定 173

实验五　DNA印迹杂交技术 175

实验六　肝总RNA的制备 179

实验七　克隆化基因在大肠埃希菌的诱导表达 182

实验八　哺乳动物细胞的转染 183

实验九　蛋白质印迹免疫分析 185

实验十　DNA的提取 188

实验十一　细胞培养实验 189

实验十二　细胞凋亡检测 190

实验十三　用电穿孔方法将重组质粒转化细菌 192

实验十四　Northern杂交技术 193

第十三章　生化技术实验 196

实验一　血红蛋白及其衍生物的吸收光谱测定 196

实验二　核酸溶液的紫外吸收测定 197

实验三　蛋白质溶液的紫外吸收测定 198

实验四　SDS-PAGE分离蛋白质 200

实验五　蛋白质定量测定Folin-酚试剂法（Lowry法） 203

实验六　聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦分离血清蛋白质 204

实验七　血清脂蛋白快速超离心分离实验 206

实验八　DEAE纤维素离子交换层析法分离血清蛋白质 206

实验九　亲和层析法纯化胰蛋白酶 208

实验十　血清白蛋白、γ球蛋白的分离纯化及鉴定 211

实验十一　密度梯度离心法分离肝细胞器 215

实验十二　外周血DNA的快速提取 216

第十四章　酶工程实验 218

实验一　凝血酶的固定化及固定化凝血酶的稳定性测定 218

实验二　固定化具有葡萄糖异构酶活性菌体的制备 219

实验三　Cu·Zn超氧化物歧化酶的分离与纯化 219

实验四　细胞色素c的制备和含量测定 222

实验五　绿豆芽中酸性磷酸酯酶的提取 224

实验六　pH对酶活力的影响——最适pH的测定 225

实验七　温度对酶活力的影响——最适温度的测定 226

实验八　底物浓度和抑制剂对酶活力的影响——Km和Ki的测定 227

实验九　酶促反应速度与时间的关系——初速度时间范围的测定 229

附录 231

附录1　生物化学实验的基本操作及原理 231

附录2　常用容量仪器的规格、使用、清洗及洗液的配制 235

附录3　化学试剂的规格与保管 239

附录4　实验室常用设备介绍 240

附录5　分子生物学常用试剂 242