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目录 1

第一篇　实验基础知识 1

第一章　实验室规则 1

第二章　生物化学及分子生物学实验的基本操作 3

第二篇 常用生物化学及分子生物学实验原理及技术 6

第一章　离心分离技术 6

第二章　分光光度法 10

第三章　层析法 14

第一节 层析法的原理及分类 14

第二节 几种常用的层析法 15

第四章　电泳技术 21

第一节 电泳的基本原理 21

第三节 聚丙烯酰胺凝胶电泳 23

第二节 醋酸纤维素薄膜电泳 23

第四节 以琼脂（糖）为支持物的电泳 26

第五章　生物大分子的制备 28

第一节 材料的选择和预处理 28

第二节 细胞的破碎及细胞器的分离 28

第三节 核酸的提取与纯化 28

第四节 浓缩、干燥及保存 30

第六章　DNA体外重组 33

第七章　聚合酶链式反应（PCR） 40

第一节　PCR实验室的要求 40

第二节　PCR原理 41

第三节　PCR在临床医学中的应用 44

第八章　核酸分子杂交 46

第三篇 生物化学及分子生物学实验 53

实验一　微量凯氏（Kjeldahl）定氮法测定蛋白质含量 53

实验二　Lowry氏法测定蛋白质含量 55

实验三　双缩脲法测定蛋白质含量 57

实验四　紫外吸收法测定蛋白质含量 58

实验五　碱性磷酸酶（AKP）的分离及Km值的测定 60

实验六　温度、酸碱度、抑制剂、激活剂对酶促反应的影响 65

实验七　氨基酸薄层层析 67

实验八　凝胶柱层析分离血红蛋白和DNP-胰糜蛋白酶 68

实验九　血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳 70

实验十　血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 72

实验十一　聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清LDH同工酶 74

实验十二　血清γ-球蛋白的分离与纯度鉴定 78

实验十三　邻甲苯胺法测定血糖浓度 80

实验十四　葡萄糖氧化酶法测定血糖 82

实验十五　饥饿和饱食对肝糖原含量的影响 83

实验十六　血清谷丙转氨酶活性测定（改良Mohun法） 85

实验十七　血清甘油三酯含量测定 86

实验十八　血清总胆固醇含量测定 89

实验十九　酮体的生成及其定性 91

实验二十　血清钙、磷测定 93

实验二十一　酵母细胞核酸的提取和定量 96

实验二十二　真核细胞中基因组DNA的提取和鉴定 98

实验二十三　真核细胞总RNA的提取和鉴定 100

实验二十四　大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 101

实验二十五　质粒DNA的提取及纯化 103

实验二十六　DNA的琼脂糖凝胶电泳 105

实验二十七　DNA重组与筛选 109

实验二十八　PCR基因扩增 111

实验二十九　Southern杂交分析 112

实验三十　Northern杂交分析 115

附录　常用缓冲液的配制 117