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目录 1

第一章 生化实验基本技术 1

第一节　分光光度法 1

一、紫外及可见分光光度法 1

二、荧光光谱分析法 5

第二节　层析法 8

一、纸层析法 8

Ⅰ．紫外吸收法测定核酸含量 （1 11

二、薄层层析法 12

三、离子交换层析法 16

四、凝胶层析法 22

第三节 电泳法 26

一、电泳方法的分类 27

二、电泳技术的应用 28

第四节　离心分离法 31

一、原理与计算 31

二、制备离心技术 34

三、分析超离心 37

本章参考文献 37

第二章 蛋白质的分子组成、结构及理化性质分析 39

第一节 概述 39

二、蛋白质的分离和纯化 39

一、蛋白质分子的基本概念 39

三、蛋白质的定量 40

四、蛋白质纯度的鉴定 40

五、蛋白质分子的序列分析 41

第二节　实验项目 42

实验一蛋白质的定量测定 42

Ⅰ．Kjeldahl定氮法 42

Ⅱ．Lowry酚试剂法 44

Ⅲ．紫外光谱吸收法 46

Ⅳ．考马斯亮蓝染色法 48

实验二 生物体液和组织蛋白质的分离和鉴定 50

Ⅰ．血清IgG的分离纯化（离子交换层析法） 50

Ⅱ．细胞色素c的制备及鉴定 54

Ⅰ．醋酸纤维薄膜电泳 60

实验三 血清蛋白质的电泳分离 60

Ⅱ．聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳 63

实验四 蛋白质理化性质分析 69

Ⅰ．等电聚焦电泳法测定蛋白质等电点 69

Ⅱ．SDS-PAGE测定蛋白质相对分子质量 71

实验五 蛋白质的分子筛层析分离及相对分子质量测定 77

Ⅰ．血红蛋白、DNP-鱼精蛋白混合物的分离（分子筛层析法） 77

Ⅱ．分子筛层析测定蛋白质相对分子质量 83

实验六 蛋白质分子组成及末端氨基酸分析 87

Ⅰ．DNS法分析蛋白质氨基酸组分 87

Ⅱ．蛋白质及多肽的N-末端氨基酸分析（FDNB法） 90

Ⅲ．蛋白质及多肽的C-末端氨基酸分析（羧肽酶法） 96

实验七 肽的N-末端测定及其顺序分析（DABITC/PITC双偶合法） 98

实验八 固定化蛋白质的免疫生化鉴定（Western印迹） 101

本章参考文献 103

一、核酸的分子组成与结构 104

第三章　核酸的分子组成及理化性质分析 104

第一节 概述 104

二、核酸的理化性质 105

三、核酸的制备和含量测定 106

第二节　实验项目 107

实验九 动物肝脏RNA的制备（苯酚法） 107

实验十 小牛胸腺DNA的制备（浓盐法） 109

实验十一核酸的含量测定 111

Ⅱ．定磷法测定核酸含量 112

Ⅲ．地衣酚法测定RNA含量 114

Ⅳ．二苯胺显色法测定DNA含量 115

实验十二 电泳法分离RNA和DNA 117

Ⅰ．琼脂糖凝胶电泳分离DNA 117

Ⅱ．聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）分离RNA 120

实验十三 DNA碱基成分分析及含量测定 123

本章参考文献 125

第四章　酶作用及酶反应动力学分析 126

第一节 概述 126

一、酶反应动力学分析 126

二、酶的抑制作用动力学 128

三、影响酶反应速率的其他因素 130

四、酶试验 131

第二节 实验项目 133

实验十四 蔗糖酶与淀粉酶作用的专一性 133

实验十五 胰蛋白酶的亲和层析法纯化 136

实验十六 酸性磷酸酶KM及Vmax值测定 143

附一、0.1N碘溶液的配制及标定 146

二、0.1N硫代硫酸钠溶液的配制及标定 147

实验十七 磷酸盐及氟化钠对酸性磷酸酶的抑制作用 148

实验十八　乳酸脱氢酶同工酶分析 151

本章参考文献 152

三、研究方法 153

二、研究目的、材料 153

第一节　概述 153

一、物质代谢定义 153

第五章 物质代谢及其激素调节 153

四、实验安排 154

第二节 实验项目 155

实验十九　胰岛素及肾上腺素对血糖浓度的影响 155

附　Nelson-Somogyi法测定血糖浓度 155

实验二十　饱食、饥饿及激素对肝糖元含量的影响 158

实验二十一 三羧酸循环中间产物对酵母耗氧率的影响（Warburg氏呼吸仪示教） 160

附　Warburg氏呼吸仪的构造和使用 161

实验二十二　脂类的薄层层析 165

实验二十三 酮体的生成与利用 167

实验二十四 血清低密度脂蛋白与极低密度脂蛋白的比浊测定 170

附 标准曲线的制作 170

实验二十五 血清脂蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 172

实验二十六 转氨基作用 175

实验二十七 血清谷丙转氨酶活性的测定（赖氏法） 177

实验二十八 生物氧化与电子传递 180

本章参考文献 181

第六章 分子生物学基本实验技术 182

第一节　概述 182

一、核酸是遗传物质 182

二、基因与基因组 182

三、DNA复制、损伤与修复 183

四、基因表达和遗传密码 185

五、基因表达的调控 187

六、分子生物学实验技术相关知识 187

第二节 实验项目 188

实验二十九　质粒DNA的提取 188

实验三十 质粒DNA酶切及琼脂糖凝胶电泳分离鉴定 191

实验三十一 质粒DNA的分子杂交 194

实验三十二　mRNA的提取与纯化 198

实验三十三 血液标本中DNA的提取 201

实验三十四 脉冲电场凝胶电泳 203

实验三十五　RNA分析——Northern杂交 205

实验三十六 聚合酶链反应（PCR）技术体外扩增DNA 209

实验三十七 反转录聚合酶链反应（RT-PCR） 212

实验三十八　cDNA文库的构建 214

实验三十九　PCR-RFLP法测定CYP2C19ml等位基因 220

实验四十 等位基因特异扩增法分析基因中单碱基突变 222

实验四十一 利用PCR差异显示mRNA 225

本章参考文献 229

附录 230

一、硫酸铵饱和度计算表 230

二、缓冲溶液的配制 232

三、常见蛋白质相对分子质量参考值 243

四、常见蛋白质等电点参考值 245

五、实验误差 246

六、实验报告 248

七、实验注意事项及应急处理 249