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目录 1

Ⅰ．根瘤菌的培养、分离和保存 1

一、培养 1

材料的灭菌 1

污染的排除 2

常规复合性培养基 3

选择性和指示性培养基 4

特定培养基 4

二、分离 6

从根瘤中分离根瘤菌 6

从土壤中分离根瘤菌 8

分离物或提供的培养物的鉴定 8

三、保存 9

琼脂培养物 9

干燥处理的培养物 10

培养物的记载 12

一、概述 14

Ⅱ．根瘤菌的定性特性 14

二、用光学显微镜鉴定 15

光源及其控制 15

相差显微镜 15

简单的水封片 16

水在油中的封片 16

单染色 16

革兰氏染色 17

嗜苏丹颗粒 18

特殊染色 18

异染色粒 19

鞭毛染色 19

类核体 19

根瘤中细菌的检定 19

根瘤结构 20

培养细胞的电子显微镜技术 22

根瘤的电子显微镜技术 23

根瘤细胞中脱氧核糖核酸的测定 23

碳源的利用 24

在石蕊牛奶中的生长及反应 24

三、培养特征和代谢特征 24

在酵母汁-甘露醇琼脂上的生长 24

维生素的刺激作用 25

四、抗原特性 25

抗血清的发生 26

血液的收集和抗血清的贮藏 28

抗血清吸附的原理 29

长凝集试验 29

短凝集试验 31

盘皿凝集法 32

用压碎的根瘤汁做凝集测定 33

用于凝集反应的吸附试验 33

凝胶免疫扩散法 33

做凝胶扩散的吸附抗血清 38

用萤光抗体反应鉴定 39

五、噬菌体和溶原性 39

噬菌体的证明 39

噬菌斑的形成 40

噬菌体的分开 40

根瘤菌噬菌体的分离 40

纯化 41

噬菌体和寄主的分类 41

吸附 42

溶原性 42

培养基 42

六、根瘤菌的鉴别 44

从根瘤中分离的培养物 44

提供的培养物 44

来自一混合菌株的培养物 44

Ⅲ、计数 48

一、概述 48

二、总生长的测定 48

总细胞计数 48

平板计数 52

浊度测定 52

三、活根瘤菌的计数 52

稀释液的制备 53

常规的平板计数 55

Miles和Misra液滴平板计数 55

间接“植物感染”计数 56

基于Fisher和Yates的密度测定 57

“最可几数”（“最大或然性”的测定） 66

应用植物感染计数时的限制 69

Ⅳ．结瘤和固氮的鉴定 70

一、概述 70

二、有效性的指标 71

三、温室和光照室方法 71

用幼苗琼脂或营养液培养的方法 71

在幼苗琼脂上的封闭式培养 72

在幼苗琼脂上的部分封闭培养 78

其他介质 81

大型装置 82

环境的控制 90

研究植物-根瘤菌相互关系的特殊技术 92

精细的固氮研究方法 92

四、田间试验 92

位置的选择 93

实验操作 94

播种前的准备 94

肥料的施用 95

接种 95

测定 96

敏感性 96

菌株的鉴定 97

用凝聚反应鉴定菌株 99

菌株的凝胶扩散法鉴定 100

不接种的豆科植物的结瘤 101

氮状况的表现征状 101

一、田间观察 101

Ⅴ．对豆科植物接种需要的估计分析 101

二、自然状况下的根瘤菌 102

初步估计 102

详尽的研究 103

从已长成或播种的豆科植物中直接分离 103

关于处理的说明 104

试验的变数 104

概述 104

三、田间条件下对接种的反应 104

设计与重复 105

观察记录与收获 106

预防措施 107

用土心作的试验 108

Ⅵ．豆科植物接种剂的生产、检查控制和应用 109

一、培养的方式和生产 109

培养方式 109

多菌株的接种剂 110

菌株的选择和保藏 110

琼脂培养物 111

液体培养物 112

泥炭（土壤-泥炭）载体培养物 112

培养物所需的标准 117

二、检查控制的方法 117

肉汤培养物的质量 118

成品的检查 119

种子上根瘤菌的数目 120

应用接种剂的用量 121

三、种子接种的方法 121

培养物的种类 121

球化种子 122

附录 127

附录一　氮素测定 127

附录二　改良的F？hraeus氏载玻片技术 134

附录三　一种手工操作的无菌播种器 136

附录四　豆科植物参考材料的收集 140

参考文献 143