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第一章 总论 1

第一节 关于基因 1

一、基因的概念 1

二、基因的结构 3

前言 4

三、基因的主要功能 5

第二节 基因的探测与分析 13

一、DNA的变性与复性 13

二、基因探针与分子杂交 13

三、基因分析的途径 14

第三节 基因诊断的特点和意义 18

第二章 基因诊断在遗传病上的应用 22

第一节 血红蛋白病 22

一、镰刀状细胞贫血的基因诊断 22

二、α地中海贫血 27

三、β地中海贫血 37

第二节 其它遗传病 52

一、苯丙酮尿症 52

二、先天性α1抗胰蛋白酶缺乏症 55

三、次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺乏症——痛风、自毁容貌综合征 58

四、血友病 60

第三节 产前胎儿性别的探测 63

第三章 基因诊断技术在其它疾病上的应用 66

第一节 大肠杆菌热敏内毒素基因的探测 66

第二节 病毒基因的探测 68

一、肠道病毒 68

二、轮状病毒 69

三、Epstein-Barr疱疹病毒 69

四、腺病毒 70

五、乙型肝炎病毒 71

六、艾滋病的基因诊断 72

第三节 寄生虫病的基因诊断 73

第四节 癌基因的探测 74

第五节 动脉粥样硬化 75

第四章 基因诊断的实验方法 78

第一节 基因诊断的一般实验步骤 78

第二节 基因探针的制备 78

一、特异基因的分离 78

二、质粒DNA的提取 94

三、DNA片段的分离制备 106

四、DNA的同位素标记 112

五、DNA的非同位素标记 124

第三节 人类色染体DNA的制备 131

一、白细胞DNA的提取 132

二、绒毛及羊水细胞DNA的提取 139

三、脾、肝及胎盘DNA的提取 142

第四节 DNA的限制性内切酶降解 144

一、概述 144

二、试剂 147

三、方法 147

四、注意事项 148

五、影响内切酶活性的常见因素 149

第五节 DNA酶解片段的电泳分离 151

一、原理 151

二、试剂 152

三、电泳装置 154

四、方法 154

五、注意事项 157

六、影响DNA电泳迁移率的主要因素 158

七、琼脂糖凝胶照像 160

一、原理 162

第六节 Southern印迹法 162

二、试剂 163

三、方法 163

四、注意事项 165

第七节 DNA分子的固相杂交 167

一、原理 167

二、一般基因探针的杂交 168

三、人工合成探针的杂交 170

四、斑点杂交及菌落或噬菌体斑的原位杂交 171

五、影响杂交的因素 175

第八节 放射自显影技术 178

附录一 重要试剂母液的配制 182

附录二 DNA数据单位 184

附录三 凝胶过滤基质 185

附录四 限制性内切酶保温缓冲液用表 186

附录五 质粒pBR322限制性内切酶图谱 187

附录六 DNA片段长度标准物 188

附录七 脱氧核苷-5′-三磷酸化合物的分子量 189

附录八 人β珠蛋白基因簇的限制性内切酶图谱及其多态性位点 190

附录九 人α1珠蛋白基因的核苷酸序列 191

附录十 人β珠蛋白基因的核苷酸序列 192