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第一章 体外DNA重组技术的酶学 1

1.1 限制性核酸内切酶 1

1.2 用DNA连接酶连接限制性酶切片段 2

1.3 通过同聚物的尾端连接DNA 9

第二章 质粒运载体 13

2.1 pSC101 13

2.2 ColE1 14

2.3 带有抗药性标志的ColE1衍生质粒 15

2.4 质粒运载体系统的生物防护 20

2.5 含有特异核苷酸顺序的质粒的筛选 22

第三章 λ噬菌体运载体 25

3.1 λ噬菌体的生物学 25

3.2 噬菌体运载体 28

3.3 晚期基因——它们在克隆运载体中的应用 33

3.3.1 噬菌体装配 33

3.3.2 生物防护 35

3.3.3 利用体外包装法提高重组体的回收率 36

第四章 克隆DNA在大肠杆菌中的表达 40

4.1 用质粒运载体克隆DNA的表达 40

4.1.1 大肠杆菌营养缺陷型的互补作用 40

4.1.2 新生多肽表达的检测 41

4.1.3 脊椎动物基因在大肠杆菌中的表达 43

4.2 λ噬菌体启动基因的表达 52

第五章 高等真核生物染色体DNA克隆片段的物理鉴定法 56

5.1 克隆的DNA在其染色体源出点上作图 56

5.1.1 原位杂交 56

5.1.2 体细胞杂交 60

5.2 电泳图谱技术 60

5.2.1 限制性酶切图谱 60

5.2.2 凝胶转移杂交法 63

5.2.3 转录体的图谱 66

5.3 用电镜作克隆DNA的图谱 68

5.3.1 变性图谱 69

5.3.2 异源双链图谱 70

5.3.3 RNA同源区的图谱 71

第六章 真核系统基因表达的研究途径 80

6.1 离体变异 80

6.2 表达系统 82

6.2.1 酵母中的克隆 82

6.2.2 用猿猴病毒40作克隆运载体 85

6.2.3 哺乳动物细胞的直接转化 90

6.2.4 克隆DNA进入爪蟾卵母细胞的微量注射法 91