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第1章 文献综述 1

1.1 自由基及抗氧化物质 1

1.1.1 自由基的产生及生物学效应 1

1.1.2 自由基的清除及防御措施 2

1.1.3 抗氧化剂研究与开发 2

1.2 转录组测序技术 3

1.3 基因序列全长获取方法研究现状 5

1.3.1 反向PCR 5

1.3.2 外源接头介导PCR 5

1.3.2.1 单特异引物PCR 6

1.3.2.2 捕获PCR 6

1.3.2.3 锅柄PCR 6

1.3.2.4 步降PCR 6

1.3.2.5 胸腺嘧啶核苷酸接头特异连接PCR 7

1.3.2.6 cDNA末端快速扩增 7

1.3.3 依赖酶切连接的PCR 7

1.4 荞麦属植物抗氧化成分研究现状 8

1.4.1 荞麦种质资源研究现状 8

1.4.2 荞麦属植物化学成分研究现状 8

1.4.2.1 荞麦的营养成分研究现状 9

1.4.2.2 荞麦抗氧化成分研究现状 9

1.5 本文的研究目标、研究内容和拟解决的关键问题 12

1.5.1 研究目标 12

1.5.2 研究内容 12

1.5.3 技术路线 12

1.5.4 特色与创新之处 12

第2章 金荞麦叶片抗氧化活性物质分析 14

2.1 前言 14

2.2 材料与方法 15

2.2.1 材料 15

2.2.2 方法 17

2.3 结果与分析 18

2.3.1 金荞麦抗氧化性能力评价结果 18

2.3.2 金荞麦典型植株和甜荞的各指标的测定结果 23

2.3.3 金荞麦和甜荞各指标之间的相关性分析 26

2.4 讨论 27

第3章 金荞麦黄酮提取工艺研究及其测量方法研究 29

3.1 前言 29

3.2 材料与方法 30

3.2.1 材料 30

3.2.2 方法 30

3.2.2.1 正交实验因素水平 30

3.2.2.2 黄酮含量的测定 30

3.2.2.3 验证试验 30

3.2.2.4 四种黄酮测定方法的波长扫描 30

3.2.2.5 四种黄酮测定方法的稳定性比较 31

3.2.2.6 方法学考察 31

3.3 结果与分析 31

3.3.1 正交实验结果分析 31

3.3.2 验证试验 33

3.3.3 四种测定方法的波长扫描结果 33

3.3.4 四种测定方法的稳定性比较 34

3.3.5 方法学考察 34

3.3.5.1 线性关系的考察 34

3.3.5.2 加样回收率试验 36

3.4 讨论 36

第4章 荞麦属植物转录组测序分析 38

4.1 前言 38

4.2 材料与方法 39

4.2.1 材料 39

4.2.2 方法 39

4.2.2.1 总RNA的提取 39

4.2.2.2 RNA纯度及完整性鉴定 40

4.2.2.3 RNA纯化 40

4.2.2.4 测序处理过程 40

4.2.2.5 组装分析过程 42

4.2.2.6 注释及目的基因序列获得 42

4.2.2.7 Unigenes数据库覆盖度评价 42

4.3 结果与分析 43

4.3.1 RNA纯度及完整性鉴定 43

4.3.2 Reads产出统计 43

4.3.3 组装分析 44

4.3.3.1 样品A的组装统计分析 44

4.3.3.2 样品B的组装统计分析 46

4.3.3.3 样品C的组装统计分析 48

4.3.3.4 样品D的组装统计分析 50

4.3.3.5 样品E的组装统计分析 51

4.3.3.6 样品F的组装统计分析 53

4.3.4 Unigenes数据库统计分析 55

4.3.5 Unigenes基因数据库覆盖度评价 56

4.3.6 Unigenes功能注释 56

4.4 讨论 57

第5章 金荞麦黄酮合成相关基因差异表达研究 58

5.1 前言 58

5.2 材料和方法 58

5.2.1 材料 58

5.2.2 方法 59

5.2.2.1 黄酮含量测量 59

5.2.2.2 RNA提取 59

5.2.2.3 第一链cDNA合成 59

5.2.2.4 引物设计与合成 59

5.2.2.5 实时荧光定量PCR 63

5.2.2.6 相关性分析 63

5.2.2.7 金荞麦黄酮合成关键基因生物信息学分析 63

5.3 结果与分析 63

5.3.1 黄酮含量测定结果 63

5.3.2 RNA提取 64

5.3.3 相对定量结果 64

5.3.4 相关性分析 64

5.3.5 金荞麦黄酮合成关键基因的生物信息学分析 74

5.3.5.1 金荞麦C4H2基因的生物信息学分析 74

5.3.5.2 金荞麦F3′5′H2基因的生物信息学分析 75

5.4 讨论 81

第6章 金荞麦维生素E合成相关基因差异表达研究 83

6.1 前言 83

6.2 材料和方法 84

6.2.1 材料 84

6.2.2 方法 84

6.2.2.1 维生素E测量 84

6.2.2.2 RNA提取及第一链cDNA合成 84

6.2.2.3 引物设计与合成 84

6.2.2.4 荧光定量PCR检测及相关性分析 87

6.2.2.5 金荞麦维生素E合成关键基因生物信息学分析 87

6.3 结果与分析 87

6.3.1 维生素E测量结果 87

6.3.2 相对定量结果 87

6.3.3 相关性分析 89

6.3.4 金荞麦维生素E合成关键基因生物信息学分析 93

6.3.4.1 金荞麦CHL P3基因的生物信息学分析 93

6.3.4.2 金荞麦TC基因的生物信息学分析 93

6.4 讨论 99

参考文献 101

主要缩写词表 111

附录 113

后记 167