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第一篇 基因工程原理 3

概论 3

0.1分子生物学概述 3

0.2基因工程概述 4

0.3基因重组技术的应用前景 5

第1章 分离目的基因和基因载体 7

1.1目的基因的获取 7

1.2基因载体的选择 10

第2章 限制性内切核酸酶的应用 15

2.1概念 15

2.2序列特征 16

2.3作用方式 17

2.5影响酶切活性的主要因素 18

2.4同裂酶和同尾酶 18

第3章 目的基因和基因载体的体外连接 19

3.1DNA连接酶 19

3.2连接方式 21

第4章 重组DNA转化宿主细胞 24

4.1受体细胞的选择 24

4.2重组基因的导入方法 25

4.3转化细胞的扩增 27

第5章 重组体阳性克隆的筛选 28

5.1遗传检测法 28

5.2物理检测法 29

5.3菌落杂交筛选法 30

5.4免疫化学检测法 31

5.6PCR法确定重组体 32

5.7DNA 序列分析 32

5.5DNA-蛋白筛选法 32

5.8真核宿主细胞的筛选标记 33

第6章 外源基因表达及表达产物的检测 34

6.1宿主细胞 34

6.2表达载体 34

6.3表达产物和表达水平 35

6.4表达产物的检测 38

6.5表达蛋白质的分离纯化 39

第二篇 常用生化技术原理 43

第1章 电泳技术 43

1.1电泳基本原理 43

1.2影响泳动度的主要因素 43

1.3常用的电泳方法 44

2.2层析原理 54

2.1概述 54

第2章 层析技术 54

2.3柱层析法 56

2.4凝胶过滤层析法 58

2.5气相色谱和高效液相色谱 61

第3章 分光光度技术 66

3.1光学原理 66

3.2 Lambert-Beer定律 67

3.3分光光度计的基本构造 68

3.4紫外可见光分光光度计 69

3.5荧光分光光度计 71

3.6酶标仪 72

第4章 离心分析法 76

4.1离心机基本原理 76

4.3离心机的结构 77

4.2离心机的分类 77

4.4离心方法 81

第5章 透析 85

5.1透析膜（袋） 85

5.2溶剂 85

5.3物理条件 86

第三篇 分子生物学常用技术 89

第1章 目的基因和基因载体的分离 89

实验1质粒DNA的提取 89

实验2真核生物基因组DNA的提取 94

实验3DNA的琼脂糖凝胶电泳 96

实验4DNA的定量分析 101

实验5PCR基因扩增 102

实验6哺乳动物mRNA的纯化与鉴定 106

实验7基因组DNA文库的建立 111

第2章 酶切与连接 117

实验1限制性内切核酸酶的酶切与鉴定 117

实验2载体与目的基因的连接 121

第3章 重组DNA的转化与筛选 125

实验1重组质粒转化大肠杆菌及初步筛选 125

实验2核酸探针的制备和标记 126

实验3原位杂交法进行重组质粒的筛选 129

实验4Northern杂交 131

实验5真核细胞基因转染和筛选 133

实验6转染细胞的筛选 135

第4章 外源基因在宿主细胞中的表达 138

实验1在大肠杆菌（E.coli）表达蛋白产物 138

实验2变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 142

实验3蛋白质杂交法检测表达蛋白 145

附：常用生物化学实验技术 149

实验1不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳 149

实验2凝胶过滤法测定蛋白质相对分子质量 157

实验3透析实验 161

实验4双缩脲反应 162

实验5胰岛素及肾上腺素对血糖含量的影响 163

实验6血糖含量测定 164

实验7蛋白质定量测定 165

第四篇 分子生物学实验室基本操作和数据 169

第1章 分子生物学实验室常规仪器设备 169

1.1实验室的常规仪器及设施 169

1.2离心机室的装备 173

1.3分析仪器室的设置 174

1.4核素实验室 181

1.5细胞培养室 184

1.6暗室 187

1.7冷室 187

第2章 实验室基本操作 188

2.1玻璃仪器的洗涤 188

2.2搅拌和振荡 188

2.3容量玻璃仪器的使用方法 189

2.4分光光度计的使用 190

2.5干燥箱和恒温箱 192

2.6电热恒温水浴 193

2.7酸度计 193

第3章 实验室常用数据 196

第4章 常用载体图谱 204

主要参考文献 230