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第一部分 生物化学与分子生物学实验基本知识 1

第一节 生物化学与分子生物学实验室规则 1

第二节 生物化学实验的基本操作 3

第二部分 生物化学与分子生物学实验原理与技术 7

第一节 分光光度法 7

第二节 离心技术 15

第三节 层析技术 27

第四节 电泳 41

第五节 分子克隆 49

第六节 聚合酶链式反应（PCR） 54

第七节 核酸分子杂交技术 62

第三部分 生物化学与分子生物学实验 71

第一节 生物化学基本实验 71

实验1　双缩脲法测定蛋白质浓度 71

实验2　Folin-酚试剂法（Lowry法）测定蛋白质浓度 74

实验3　考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量 76

实验4　紫外分光光度法测定蛋白质 79

实验5　血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳 81

实验6　预染血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 86

实验7　聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清乳酸脱氢酶同工酶 88

实验8　SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） 92

实验9　等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点 97

实验10　影响酶活性的因素 100

实验11　蔗糖酶的专一性 103

实验12　底物浓度对酶促反应速度的影响——过氧化氢酶Km的测定 105

实验13　抑制剂对酶促反应速度的影响 109

实验14　血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性测定（赖氏法） 111

实验15 血清甘油三酯含量的测定——乙酰丙酮法 114

实验16　血浆高密度脂蛋白（HDL）-胆固醇含量的测定 116

实验17　酮体的生成 118

实验18　运动对全血乳酸含量的影响 120

第二节 生物化学综合实验 122

实验19　激素对血糖浓度的影响 122

实验20　血清γ-球蛋白的分离与纯度鉴定 126

实验21　血清清蛋白的分离及电泳鉴定 130

实验22　核酸的分离提取、成分鉴定及含量测定 133

第三节 分子生物学实验 148

实验23　大肠杆菌感受态细胞制备及外源DNA的转化 148

实验24　质粒DNA的提取 152

实验25　质粒DNA的限制性内切酶酶切 154

实验26　DNA的琼脂糖凝胶电泳 157

实验27　PCR基因扩增 159

实验28　Southern杂交分析 162

实验29　Northern杂交分析 166

附录 169

附录Ⅰ 化学试剂分级及注意事项 169

附录Ⅱ 常用缓冲液配制方法 170

附录Ⅲ 重铬酸洗液的配制与再生 173

参考文献 175