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一、实验须知 1

第一章 绪论 1

二、实验记录及实验报告的书写 2

第二章 生化实验基本技术 4

一、生化实验基本操作 4

二、生化常用实验样品的制备 7

三、离心技术 9

四、分光光度法 11

五、电泳技术 17

六、层析法 22

七、生化自动分析技术 30

一、 蛋白质定量测定 35

实验一 紫外分光光度法 35

第三章 蛋白质实验 35

实验二 Folin-酚试剂法（Lowry法） 37

实验三 双缩脲法 38

实验四 考马斯亮蓝法（染色法） 39

实验五 BCA法测蛋白质含量 40

实验六 血清总蛋白、清蛋白定量及清/球比值测定 41

二、 血清蛋白电泳分离 43

实验七 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳 43

实验八 血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳 45

三、 蛋白质等电点测定 47

实验九 蛋白质等电点测定（沉淀法） 47

实验十 薄层等电聚焦电泳测定蛋白质的等电点 48

四、蛋白质分子量测定 51

实验十一 薄层SDS-PAGE测定蛋白质的分子量 51

实验十二 梯度凝胶电泳法 54

实验十三 凝胶过滤法 57

实验十四 CM-52离子交换柱层析法分离蛇毒蛋白质 59

实验十五 分子筛层析（凝胶过滤） 60

实验十六 DNS-氨基酸的聚酰胺薄膜层析 61

第四章 酶 64

一、酶活性测定 64

实验十七 碱性磷酸酶活力的测定 64

二、酶促反应动力学实验 66

实验十八 酶浓度对酶促反应的影响 67

实验十九 碱性磷酸酶Km值的影响 68

实验二十 PH对酶促反应的影响 69

实验二十一 温度对酶促反应的影响 70

实验二十二 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制 71

实验二十三 琼脂糖电泳法分析乳酸脱氢酶同工酶 72

三、同工酶测定 72

实验二十四 醋酸纤维膜电泳法分析乳酸脱氢酶同工酶 73

实验二十五 碱性磷酸酶同工酶的电泳分离及鉴定 75

第五章 生物氧化 77

实验二十六 乳酸脱氢酶及辅酶的作用 77

实验二十七 细胞色素体系的作用及其抑制 78

第六章 分子生物学实验 80

实验二十八 外周血白细胞DNA提取（微量法） 80

实验二十九 全血DNA的提取与鉴定 81

实验三十 DNA的琼脂糖凝胶电泳 82

实验三十一 真核细胞总RNA的制备 83

实验三十二 植物组织总RNA的提取（Thomas RNA extraction） 85

实验三十三 逆转录PCR（RT-PCR） 86

实验三十四 质粒DNA的提取与鉴定（碱法快速小量提取） 88

实验三十五 RNA电泳及Northern blot杂交 89

实验三十六 生物素标记探针的制备及杂交检测 92

实验三十七 蛋白印迹（Western blot） 94

实验三十八 PCR-SSCP（单链构象多态性分析） 96

实验三十九 PCR产物与PGEM-T重组及转化 97

实验四十 PCR实验设计 101

第七章 临床生化 104

一、糖的测定 104

实验四十一 总糖测定（3，5-二硝基水杨酸比色法） 104

实验四十二 血糖测定（葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法） 105

实验四十三 胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响 106

实验四十四 红细胞中糖的酵解作用 107

二、脂类测定 110

实验四十五 TG测定（乙酰丙酮显色法） 110

实验四十六 TG测定（酶法，一步终点比色法） 112

实验四十七 血清总胆固醇测定（硫磷铁法） 113

实验四十八 血清总胆固醇测定（胆固醇氧化酶法） 115

实验四十九 高密度脂蛋白（HDL）的测定（酶法） 116

实验五十 血清载脂蛋白apoA1的测定（免疫透射比浊法） 117

实验五十一 血清载脂蛋白apoB的测定（免疫透射比浊法） 119

实验五十二 apoA1和apoB的同时测定（免疫火箭电泳法） 120

三、血清酶的测定 122

实验五十三 血清丙氨酸基转移酶（ALT）活性的测定（赖氏法） 122

实验五十四 血清天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性的测定（连续监测法） 125

实验五十五 血清天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性的测定（赖氏法） 126

四、维生素的测定 127

实验五十六 维生素B1的测定（荧光法） 127

实验五十七 维生素B1的测定（重氮苯磺酸法） 128

实验五十八 维生素C的定量（2，4-二硝基苯肼法） 129

实验五十九 血清尿素的测定（二乙酰-肟法） 131

五、血清的其他成分测定 131

实验六十 血清（或血浆）肌酐测定（血清直接定量不除蛋白法） 132

实验六十一 血清（或尿）淀粉酶（AMS）活力测定（碘-淀粉比色法） 135

实验六十二 血清总胆红素及直接胆红素（一分钟胆红素）测定 136

六、尿液成分定性检验 138

实验六十三 尿蛋白定性检验（加热醋酸法） 138

实验六十四 尿糖定性检验（铜还原法，班氏试剂法） 138

实验六十五 尿酮体定性检验（亚硝基铁氰化钠法） 139

实验六十六 尿胆（素）原定性检验（改良欧氏法） 140

实验六十七 尿胆素定性检验（改良许氏法） 140

实验六十八 尿胆红素定性检验 141

第八章 综合实验 143

实验六十九 血清γ-球蛋白的提取及鉴定 143

实验七十 质膜的提取及鉴定 145

附录 152

附录一 缓冲溶液的配制 152

附录二 常用蛋白质分子量及等电点 159

附录三 常用一些凝胶技术数据 161

附录四 硫酸铵饱和度的常用表 165

附录五 常用酸碱指示剂 166

附录六 常用原子量表 167

附录七 试剂的配制及其分级 169

附录八 易变质及需要特殊方法保存的试剂 170

附录九 实验误差及数据处理 171

附录十 法定计量单位 177

附录十一 希腊字母表 179

附录十二 常用临床生化检验项目及正常值范围 180

主要参考书目 181

实验七十二 实验设计 250